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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 溶酶体染色试剂盒是利用BBcellProbe® L系列探针进行溶酶体特异性染色的试剂盒。
贝博® BBcellProbe® L系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的溶酶体体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记溶酶体。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性溶酶体上。可有效标记活细胞。
本试剂盒中的BBcellProbe® L04溶酶体染色探针能选择性定位于溶酶体，L04的荧光性在低pH值时不会降低，在低pH时，L04发出强烈的黄色荧光。这种独特pH依赖荧光使得L04能做为理想的溶酶体探针，除了选择性标记溶酶体外，还可以用来检测溶酶体内pH值的变化。
BBcellProbe® L04溶酶体黄色荧光标记的溶酶体探针，具有384/540nm的最大激发/发射波长。
BBcellProbe® L系列溶酶体探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，贝博还可以提供绿色、红色等颜色的染色试剂盒。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃保存
注意事项
1. 染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2. 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1. 激光共聚焦
2. 荧光显微镜
2. 荧光显微镜
适用样本
1. 贴壁细胞
2. 悬浮细胞
2. 悬浮细胞
产品应用
1. 激光共聚焦
2. 荧光显微镜
2. 荧光显微镜
仪器准备
1. 激光共聚焦/荧光显微镜
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液 或者HBSS
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. L04染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5. 最好使用HBSS缓冲液（含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
6. L04染料具有环境敏感性，环境发生改变L04会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
7. 染色后立即进行分析。
8. 操作过程中需要尽量避光。
9. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
2. L04染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5. 最好使用HBSS缓冲液（含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
6. L04染料具有环境敏感性，环境发生改变L04会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
7. 染色后立即进行分析。
8. 操作过程中需要尽量避光。
9. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
使用方法
1、 染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® L04荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基50倍稀释，配制成染色工作液。
2、 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞。加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育10分钟～120分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或激光共聚焦显微镜下观察。最大激发/发射波长为384 / 540 nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育5分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于激光共聚焦显微镜检测。最大激发/发射波长为384 / 540 nm。
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® L04荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基50倍稀释，配制成染色工作液。
2、 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞。加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育10分钟～120分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或激光共聚焦显微镜下观察。最大激发/发射波长为384 / 540 nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育5分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于激光共聚焦显微镜检测。最大激发/发射波长为384 / 540 nm。
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